丝裂霉素可以阻断细胞有丝分裂，灭活细胞。

 

Protocal

 

1.        离心收集细胞，用培养基(含25mM HEPES)，调节细胞密度至5~10×10⁶/ml。

2.        每毫升细胞加入丝裂霉素(500ug/ul)50ul，终度为25ug/ml。

3.        37 °C水浴60min，每间隔15min振荡细胞。

4.        用缓冲液离心洗细胞4次以上。

5.        对贴壁细胞灭活后用作饲养层细胞，可以在细胞生长至75％汇集时，培养瓶中加入丝裂霉素溶液，终浓度25ug/ul，培养过夜，用PBS涮洗二次，加入新鲜完全培养基再培养2小时后倒去，再次用PBS涮洗二次，即可用作饲养层细胞。

 

注：

 

1.        应充分洗净孵育的残留丝裂霉素；

2.        饲养层细胞灭活后，通常可以存活2~3周。

3.        对肿瘤细胞的灭活，可以适当加大丝裂霉素浓度。