Protocal：
1. 细胞冻存前24-48小时传代培养，使细胞处于指数生长期；
2. 离心收集细胞，用加血清的培养基悬起细胞，1-2×107/ml；
3. 另取一离心管，加入培养基、40%血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMSO）至20%浓度，即制成双倍的冻存液；
4. 取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液；
5. 将悬液加入灭菌冻管中，1-2 ml/支，严密封口后，注明细胞名称、代数、日期，立即置4度冰箱中，30分钟后转入-20度冰箱中，4-8小时后，再转入-70度冰箱过夜后转入液氮中保存（或直接转入液氮中）；
6. 复苏一支细胞，检测细胞活力及有无污染。
注：
1． 细胞冻存前应保证细胞的活力好，无污染；
2． 此处介绍方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤；缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损；
3． 冻存可用10%-90%的血清，一般高浓度血清有助于维护细胞活力，此处介绍20%终浓度有利于细胞悬浮而少沉积（4度时），复苏存活率在80%-90%以上，对原代培养细胞，以90%血清冻存更为有效；
4． 细胞在-15度左右胞内形成结晶对细胞损伤最大，缓慢降温有助于减少损伤，故放入-20度冰箱中冻存可实现缓慢降温较为方便，保存时间过久会影响细胞活力；
5． 细胞冻存后复苏存活率应保证在80%以上；
6． 细胞在液氮中可长期冻存无限时间，而不会影响细胞活力；在-70度可保存数月；
7． DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存；
8． 程序降温仪可以更好控制降温过程，但严格按照上述过程操作，可以达到相同的冻存效果。