Protocal:

 

1．  取带盖金属或塑料杯，加入温水，调至38-39度。

2．  从液氮灌中取出冻存管，立即投入水浴中加盖或用毛巾掩盖杯口。

3．  等冻存管中液体融化后取出，在无菌操作台中，用酒精棉球消毒管口后打开，吸出冻存细胞，按步骤4.1或2进行。

4．  1. 吸出细胞置试管中，缓慢滴加入培养基，摇动试管，至8ml（共需2分钟），200×g离心5分钟，吸弃上清，用完全培养基重新轻轻悬浮细胞，置培养瓶培养。或者2. 将冻存细胞置培养瓶中，缓慢滴加入完全培养基，稀释至20ml，再分二瓶放入孵箱培养， 悬浮细胞在4-8小时后换液，贴壁细胞在细胞贴壁后即可更换培养基。

 

注：

 

1.       复苏细胞时，应防止冻伤，不可用手直接从细胞袋中取出细胞，应用镊子镊出；

2.       有些玻璃冻存管如管口漏入液氮，复苏时会发生爆炸，塑料冻存管偶尔也会发生爆炸，故应选用适当的容器，并加盖盖好。

3.       为维护细胞活力，快速复温，缓慢稀释（细胞适应从高渗降为低渗），及时洗去冻存液是关键。

4.       将冻液稀释至20ml，此时二甲基亚砜浓度较低，细胞在短时间内能够耐受，且不会因复苏后立即离心而损伤细胞活力，是较好的复苏方法。