有多种化学固定细胞的方法，用于保存荧光标记样本、电镜样本或做细胞表型研究的样本。本节介绍荧光标记细胞样本的化学固定。

 

Protocal:

 

1.        收集细胞，悬于0.5ml PBS中，细胞浓度5×10⁶/ml。

2.        在试管中加入5ml 4%多聚甲醛(PBS配制，pH7.2，4 °C预冷)。

3.        用注射器吸取细胞悬液，装上18号细针头，向固定液中快速推注入细胞悬液。

4.        4°C固定15～30分钟。

5.        离心洗细胞，PBS洗一次，加入0.5ml PBS充分悬浮细胞后，再次用注射器收集细胞悬液，快速注入－20°C预冷的70％酒精中，置于－20 °C 保存。

 

注：

 

1．可保存数月；

2．也可仅用多聚甲醛或70％酒精固定，但效果不如本法好。

3．90％以上酒精易使细胞形成团块，故以70％酒精为佳。

4．用注射器快速推注细胞悬液，可防止细胞聚成团。

5．细胞功能学研究中所行化学固定，用4％多聚甲醛固定15～30分钟，充分洗细胞后即可应用。