Protocal：

 

1.        颈椎脱臼法处死小鼠，75%酒精浸泡3分钟后，将小鼠置于无菌吸水纸上，腹面朝上；

2.        在小鼠股骨下端皮肤剪开一个小口，撕开皮肤，充分暴露股骨及胫骨；

3.        用镊子夹住胫骨，用眼科剪沿股骨尽量分离肌肉；

4.        在膝关节处剪开股骨与胫骨，用镊子提起股骨，在股骨大转子关节处剪下股骨，如需要可再分离下胫骨，放入培养皿中；

5.        进一步清除股骨及胫骨上肌肉组织；

6.        鼠齿镊夹住股骨（或胫骨）剪去骨骺，用20号针头刺穿骨末端；

7.        用装有培养基的1ml注射器，向骨髓腔内快速推入培养基，冲洗出骨髓细胞，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞；

8.        可用注射器反复推拉骨髓细胞悬液几次，即得单细胞悬液。

 

注：

 

1.        6-8周龄小鼠最适用，一般每只小鼠可获得4-6×10⁷细胞；

2.        第6部可省去，改用1ml 注射器直接钻入骨末端即可，避免剪去骨骺时损失过多骨髓细胞；

3.        在分离股骨大转子一端时，应防止折断股骨头；

4.        如有需要，细胞悬液可用尼龙网过滤，进一步去除骨碎片及杂质。