VDfast50
小量病毒DNA快速抽提试剂盒
适用范围：HBV、CMV (全血、血浆、血清、体液)
保存条件：DV2液4℃保存，试剂盒其它部分室温保存，保质期1年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 样本量 | 全血、血浆、血清或其它体液样本50μl（也可以增加至数毫升） |
| 耗时 | 15min |
| 柱容量 | 15μg |
| 洗脱体积 | 25-50μl |
| 得率 | >90% |
| 特点 | 1. 适于全血、血浆、血清或其它体液样本中小量、微量病毒DNA的抽提，包括HBV、CMV、EBV等各类病毒 2. 可以从大量体积的低拷贝样本中浓缩富集微量病毒DNA，用于血筛等检测 3. 得率高，方法稳定，DNA不易丢失，每次提取都可以稳定获得DNA，批间变异极小；提取的DNA纯度高，不易降解 4. 操作简单，耗时短，全程常温操作，不需Proteinase K消化 5. 确保生物安全性，临床样本加入DV1液后可以快速灭活所有病源微生物 |
| 用途 | PCR、定量PCR等 |
试剂盒组成 ： ( Catalog no. 220200 100 次)
| DV1 | 15ml（特殊需要的客户提供60ml） |
| DV2 | 20ml（特殊需要的客户提供80ml） |
| 洗脱液 | 10ml |
| 内套柱，外套柱 | 100套 |
| 说明书 | 1份 |
操作流程：
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1. 吸取全血、血清、血浆或其它体液样本50μl，放入1.5ml eppendorf管中。
2. 加入DV1液150μl，以手腕充分用力振荡混匀10-20次，成为均一的裂解液，静置5min。
3. 加入DV2液200μl， 温和地翻转颠倒混匀10-20次，呈均质的乳糜状液体。
4. 室温离心12,000g，2min。
5. 在内套管中加入200μl异丙醇。小心吸取离心后的上层液体150μl（注意不要搅动界面层）至内套管中，立即吹打混匀数次。
6. 离心30s，在内套管中直接加入异丙醇200μl，离心2min。
7. 将内套管取出，放入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液25μl-50μl，室温放置2min（可以洗脱绝大部分DNA，如果要增加洗脱率，可置60℃水浴5min）。
8. 离心1min，获得基因组DNA。
注意事项：
1. 除DV2液4℃保存外，试剂盒其它部分室温保存。保质期1年。
2. 离心速度均为12,000g，室温离心。离心速度以eppendorf 5810离心机为例： 12,000g=10,629rpm，其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. 自备分析纯异丙醇，试剂盒提供60ml空瓶一个，首次使用时倒满，用后拧紧瓶盖。
4. DV2液具有强烈腐蚀性，操作时要戴手套和防护眼镜，在通风柜中进行，若不慎沾染，立即用大量清水冲洗，必要时到门诊处理。用后拧紧瓶盖，置4℃保存。
5. 加入DV1液后要用手腕充分用力振荡10-20次（不会引起DNA断裂），以确保样本完全溶解，振荡不充分会导致DNA得率降低。
6. 加入DV2液后要温和地翻转颠倒混匀，直至呈均质乳糜状的均一液体。
7. 样本单次提取的限量是50μl，如果需要处理更大体积的样本，可以按照相应比例增加DV1、DV2的用量，离心后获得的上层液体在新的离心管中与等体积的异丙醇混匀后，分数次取700μl，反复离心收集入同一内套管（根据客户的需要，可以提供60ml DV1，80ml DV2 的特殊包装，如果用于血筛可以提供更大包装的试剂）。
8. 洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的洗脱效率，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6（10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA）。
9. 尽量保证在膜中央加入洗脱液25-50μl，低于25μl将不能保证吸附膜被充分浸润；室温放置2min可以洗脱绝大部分DNA，60℃水浴5min可以确保所有DNA被洗脱。
10. 提取的DNA可以放在4℃或-20℃保存，长期应在-80℃分装保存，避免多次反复冻融。