VRfast100
小量病毒总RNA快速抽提试剂盒
适用范围：HCV、HIV (全血、血浆、血清、体液)
保存条件：试剂盒室温保存，保质期1年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 样本量 | 全血、血浆、血清或其它体液样本100μl（也可以增加至数毫升） |
| 耗时 | 15min |
| 柱容量 | 15μg |
| 洗脱体积 | 25-50μl |
| 得率 | >90% |
| 特点 | 1. 适于全血、血浆、血清或其它体液样本中小量、微量病毒RNA的抽提，包括HCV、HIV等各类病毒 2. 可以从大量体积的低拷贝样本中浓缩富集微量病毒RNA，用于血筛等检测 3. 得率高，方法稳定，DNA不易丢失，每次提取都可以稳定获得RNA，批间变异极小；提取的RNA纯度高，不易降解 4. 操作简单，耗时短，全程常温操作，不需Proteinase K消化 5. 确保生物安全性，临床样本加入RV1液后可以快速灭活所有病源微生物 |
| 用途 | RT-PCR、定量PCR等 |
试剂盒组成 ： ( Catalog no. 220170 100 次)
| RV1 | 50ml（特殊需要的客户提供200ml） |
| 洗脱液 | 10ml |
| 内套柱，外套柱 | 100套 |
| 说明书 | 1份 |
操作流程：
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1. 吸取全血、血清、血浆或其它体液样本100μl，放入1.5ml eppendorf管中。
2. 加入RV1液500μl，温和地翻转颠倒混匀10次，静置5min，成为均一的裂解液。
3. 加入氯仿100μl， 温和地翻转颠倒混匀10-20次，呈均质的乳糜状液体。
4. 室温离心12,000g，2min。
5. 在内套管中加入150μl异丙醇。小心吸取离心后的上层液体125μl-150μl（注意不要搅动界面层）至内套管中，立即吹打混匀数次。
6. 离心30s，在内套管中直接加入异丙醇150μl，离心2min。
7. 将内套管取出，放入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液25μl-50μl，室温放置1-2min。
8. 离心1min，获得总RNA（提取的总RNA置于4℃或冰浴中，尽快用于下游实验）。
注意事项：
1. 试剂盒室温保存。保质期1年。RV1液置4℃避光保存保质期更长。
2. 离心速度均为12,000g，室温离心。离心速度以eppendorf 5810离心机为例： 12,000g=10,629rpm，其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. 重要提示：RV1具有强烈腐蚀性，操作时要戴手套和防护眼镜，最好在通风柜中进行，若不慎沾染，立即用大量清水冲洗，必要时到门诊处理。
4. 自备无污染的分析纯异丙醇，试剂盒提供60ml空瓶一个，首次使用时倒满，用后拧紧瓶盖。
5. 避免环境中RNA酶污染，操作要戴手套，所有枪头和eppendorf管以DEPC水处理，移液枪保证洁净无RNA酶污染。如果把试剂放在超净台（普通超净台或专用的桌面PCR超净台）中操作，可以有效减少RNA酶污染。
6. 样本抽取后应在4小时内提取RNA，或者置－80℃冻存，复温溶解后立即用于提取。
7. 样本单次提取的限量是100μl，如果需要处理更大体积的样本，可以按照相应比例增加RV1的用量，离心后获得的上层液体在新的离心管中与等体积的异丙醇混匀后，分数次取700μl，反复离心收集入同一内套管（根据客户的需要，可以提供200ml DV1的特殊包装，如果用于血筛可以提供更大包装的试剂）。
8. 洗脱液pH<7.0时会明显降低RNA的洗脱效率，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6。
9. 尽量保证在膜中央加入洗脱液25-50μl，低于25μl将不能保证吸附膜被充分浸润；室温放置1-2min可以洗脱绝大部分RNA。