BACfast200
小量细菌基因组DNA快速抽提试剂盒
适用范围：各类细菌
保存条件：DF3液4℃保存，试剂盒其它部分室温保存，保质期1年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 样本量 | 各类培养细菌、分离获得的微量细菌等<1×108 |
| 耗时 | 30min |
| 柱容量 | 100μg |
| 洗脱体积 | 25-100μl |
| 纯度 | OD260/280 : 1.7-1.9 |
| 特点 | 1. 适于各类少量、微量细菌样本基因组DNA的抽提 2. 操作简单，耗时短，全程常温操作，不需Proteinase K消化 3. 方法稳定，每次提取都可以成功获得DNA 4. 提取的DNA纯度高，片段长，不易降解，可以满足大部分后继实验要求 5. 确保生物安全性，临床样本加入DF2液后可以快速灭活所有病源微生物 |
| 用途 | PCR, PCR-SSP等 |
试剂盒组成 ： ( Catalog no. 220260 50 次)
| DF1 | 3ml |
| DF2 | 20ml |
| DF3 | 20ml |
| 洗液 | 60ml（已加有15ml） |
| 洗脱液 | 10ml |
| 内套柱，外套柱 | 50套 |
| 说明书 | 1份 |
操作流程：
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1. 取培养的细菌菌液（或含有微量细菌的液体样本），放入1.5ml eppendorf管中，离心12,000rpm，2min。
2. 吸弃所有上清，充分震荡分散细菌团块后，加入DF1液50μl，充分振荡混匀。
3. 加入DF2液350μl，以手腕充分用力振荡混匀10-20次，成为均一的裂解液，静置10min。
4. 加入DF3液400μl，温和地翻转颠倒混匀10-20次，呈均质的乳糜状液体。
5. 室温离心12,000g，2min。
6. 小心吸取上层液体300-350μl（注意不要搅动界面层）至新的eppendorf管中，再加入等体积异丙醇，立即颠倒混匀1min。
7. 将混匀后的液体全部直接倒入内套管，离心1min。
8. 弃去外套管中液体，内套管中加入500 μl洗液，离心1min。再重复此过程洗一次。
9. 取出内套管，弃去外套管中液体，仍然套回内套管，不加洗液，离心1min。
10. 将内套管取出，放入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液25μl-100μl，室温放置5min（60℃水浴5min，可以增加DNA洗脱率）。
11. 离心1min，获得基因组DNA。
注意事项：
1. 除DF3液4℃保存外，试剂盒其它部分室温保存。保质期1年。
2. 离心速度均为12,000g，室温离心。离心速度以eppendorf 5810离心机为例： 12,000g=10,629rpm，其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. DF3液具有强烈腐蚀性，操作时要戴手套和防护眼镜，在通风柜中进行，若不慎沾染，立即用大量清水冲洗，必要时到门诊处理。用后拧紧瓶盖，置4℃保存。
4. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇，用后拧紧瓶盖。
5. 加入DF2液后要用手腕充分用力振荡10-20次（不会引起DNA断裂），以确保样本完全溶解（样本未被充分裂解时可以见到有半透明的絮状物，粘滞度较高；充分裂解后为均匀透明的液体，粘滞度降低），振荡不充分会导致DNA得率降低。
6. 加入DF3液后要温和地翻转颠倒混匀，用力振荡会导致DNA片段断裂。要求提取DNA的分子量越高，混匀时就越要轻柔缓慢，直至呈均质的乳糜状均一液体。
7. 吸取上层液体时用粗口吸管（普通1ml 加样枪头口太小，会切割DNA，剪去约5mm尖后即可），注意不要搅动界面层，如果吸入了界面沉淀物，应当舍弃。
8. 洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的洗脱效率，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6（10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA）。
9. 尽量保证在膜中央加入洗脱液25-100μl，低于25μl将不能保证吸附膜被充分浸润；室温放置5min可以洗脱绝大部分DNA，60℃水浴5min可以确保所有DNA被洗脱。
10. 提取的DNA可以放在4℃或-20℃保存，长期应在-80℃分装保存，避免多次反复冻融。