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Plantmilk - 植物基因组DNA快速抽提试剂盒 (玻璃奶法)
2006/4/22 3:09:10  飞捷生物
 

Plantmilk

 

 

植物基因组DNA快速抽提试剂盒 (玻璃奶法)

 

Catalog no. 220110     25

 

 

 

 

保存条件RNase A4℃(或-20℃)保存,试剂盒其它部分室温保存,保质期2年。

 

技术支持使用中遇到任何问题或建议,请通过E-mailquestion@fastagen.com)与我们的技术支持部门联系,部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。

性能介绍

 

原理

应用glass milk 捕获核酸方法

适用

植物细胞DNA提取

处理量

植物组织≤0.2g /

耗时

40min

洗脱体积

200μl

特点

1.        全程在1.5ml eppendorf管中操作完成

2.        提取无须使用酚

3.        DNA得率高,纯度高

用途

质量能够满足各种分子生物学要求

 

试剂盒组成 (Catalog no. 220110   25 )

 

RNase A

200μl (10mg/ml4℃冰箱保存)

L1

10ml

L2

50ml

L3

2ml(含glass milk,用前摇匀)

洗液

60ml(已加有15ml

洗脱液

10ml

说明书

1

 

操作流程:

实验操作前请先认真阅读“注意事项”

1.        植物组织≤0.2g,经液氮研磨至干粉状。待液氮完全挥发后进入下一步。

2.        加入L1400μlRNase A 8μl,温和地翻转颠倒混匀10-20次,室温放置5mim

3.        加入L21ml,温和地翻转颠倒混匀10-20次,室温放置5mim

4.        离心2min,吸取上清放入新的eppendorf管中,加入L380μl(用前混匀),温和地翻转颠倒混匀10-20次,室温放置10min,其间颠倒混匀数次。

5.        离心1min,吸弃上清,加入L21ml,充分混匀沉淀。

6.        离心1min,吸弃上清,加入洗液1ml,充分混匀沉淀。

7.        重复步骤6

8.        离心2min,尽量吸干上清,室温晾干约10分钟。

9.        加入洗脱液200-300μl,混匀,室温放置2min(增加洗脱率时55℃水浴,5min)。

10.    离心1min,吸取上清,即为DNA(注意不要搅动沉淀,或用带滤芯的枪头吸取)。

 

(附:要充分去除产物中的乙醇,可以在步骤8吸干上清后,加入丙酮1ml,充分混匀沉淀,离心1min,吸弃上清,55℃温育器上烘干丙酮约10min,再进入步骤9

 注意事项:

 

1.        RNase A 4℃冰箱保存外,试剂盒其余部分室温保存,保质期2年。

2.        离心速度均为12,000rpm-14,000rpm。以eppendorf 5417离心机为例,12,000rpm13,362g,其它类型离心机转速应达到相近的g数。

3.         首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇,用后拧紧瓶盖。

4.        取用新鲜组织、嫩组织,尽可能去除叶脉、叶柄。1.5 cm 直径的页片约为25-75mg,表面积12 cm2 (e.g. 4 x 3 cm) 170-510mg

5.        液氮研磨一定要保证组织在研磨过程中形如干粉状。

6.        组织若多,可适当加大L1液和L3液的用量,其它成份不变。

7.        加入L1液、L2液后混匀一定要温和,否则DNA大分子将被打断,部分降解。

8.        L3液放置后glass milk出现沉淀,是正常情况,打开L3液管前要先摇匀glass milk

9.        尽量保证洗脱液充分浸润沉淀,室温放置2min可以洗脱绝大部分DNA,如果要增加洗脱率,可置55-60 水浴5min。洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的洗脱效率,而国内实验室用水大多呈偏酸性,自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.610mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA)。

 

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