Plantmilk
植物基因组DNA快速抽提试剂盒 (玻璃奶法)
保存条件:RNase A液4℃(或-20℃)保存,试剂盒其它部分室温保存,保质期2年。
技术支持:使用中遇到任何问题或建议,请通过E-mail(question@fastagen.com)与我们的技术支持部门联系,部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍:
原理 | 应用glass milk 捕获核酸方法 |
适用 | 植物细胞DNA提取 |
处理量 | 植物组织≤0.2g /次 |
耗时 | 40min |
洗脱体积 | 200μl |
特点 | 1. 全程在1.5ml eppendorf管中操作完成 2. 提取无须使用酚 3. DNA得率高,纯度高 |
用途 | 质量能够满足各种分子生物学要求 |
试剂盒组成 : (Catalog no. 220110 25 次)
RNase A | 200μl (10mg/ml,4℃冰箱保存) |
L1液 | 10ml |
L2液 | 50ml |
L3液 | 2ml(含glass milk,用前摇匀) |
洗液 | 60ml(已加有15ml) |
洗脱液 | 10ml |
说明书 | 1份 |
操作流程:
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1. 植物组织≤0.2g,经液氮研磨至干粉状。待液氮完全挥发后进入下一步。
2. 加入L1液400μl及RNase A 8μl,温和地翻转颠倒混匀10-20次,室温放置5mim。
3. 加入L2液1ml,温和地翻转颠倒混匀10-20次,室温放置5mim。
4. 离心2min,吸取上清放入新的eppendorf管中,加入L3液80μl(用前混匀),温和地翻转颠倒混匀10-20次,室温放置10min,其间颠倒混匀数次。
5. 离心1min,吸弃上清,加入L2液1ml,充分混匀沉淀。
6. 离心1min,吸弃上清,加入洗液1ml,充分混匀沉淀。
7. 重复步骤6
8. 离心2min,尽量吸干上清,室温晾干约10分钟。
9. 加入洗脱液200-300μl,混匀,室温放置2min(增加洗脱率时55℃水浴,5min)。
10. 离心1min,吸取上清,即为DNA(注意不要搅动沉淀,或用带滤芯的枪头吸取)。
(附:要充分去除产物中的乙醇,可以在步骤8吸干上清后,加入丙酮1ml,充分混匀沉淀,离心1min,吸弃上清,55℃温育器上烘干丙酮约10min,再进入步骤9)
注意事项:
1. 除RNase A 4℃冰箱保存外,试剂盒其余部分室温保存,保质期2年。
2. 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm。以eppendorf 5417离心机为例,12,000rpm=13,362g,其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇,用后拧紧瓶盖。
4. 取用新鲜组织、嫩组织,尽可能去除叶脉、叶柄。1.5 cm 直径的页片约为25-75mg,表面积12 cm2 (e.g. 4 x 3 cm) 约170-510mg。
5. 液氮研磨一定要保证组织在研磨过程中形如干粉状。
6. 组织若多,可适当加大L1液和L3液的用量,其它成份不变。
7. 加入L1液、L2液后混匀一定要温和,否则DNA大分子将被打断,部分降解。
8. L3液放置后glass milk出现沉淀,是正常情况,打开L3液管前要先摇匀glass milk。
9. 尽量保证洗脱液充分浸润沉淀,室温放置2min可以洗脱绝大部分DNA,如果要增加洗脱率,可置55℃-60℃ 水浴5min。洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的洗脱效率,而国内实验室用水大多呈偏酸性,自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6(10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA)。