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WHO推荐使用的SARS实验室诊断方法
2003/12/4 17:14:26  飞捷生物
 

 

实验室检测结果说明 

SARS阳性诊断结果

1检测SARS病毒的PCR确证阳性:

至少2种不同的临床标本(如鼻咽分泌物和粪便)

采自病程中2天或2天以上的同一临床标本(如2份或更多份鼻咽吸出物)

采用2种不同试验或使用原标本在不同情况下重复试验

2)  ELISAIFA检测血清抗体阳转:

急性期血清抗体阴性随之康复期抗体阳性

康复期血清抗体滴度较急性期高4倍或更多

3) 病毒分离

从使用可靠的PCR方法确证阳性的标本中利用细胞培养分离出SARS冠状病毒。 

阳性PCR的确证

每次PCR,其过程必须包括恰当的阴性和阳性对照,此对照应产生预期的结果:

标本抽提过程中加1份阴性对照及一份空对照用于PCR循环

一份阳性对照用于抽提及PCR循环

病人样本与弱阳性对照混合以检测PCR抑制性物质(抑制对照)
 

如果PCR获得阳性结果,应由以下方法确认:

使用原样本重复PCR

或在另一实验室检测同一样本

扩增基因组另一区段能进一步增强试验特异性
 

用于SARS的实验室检测方法

标准实验室应具备国家级水平

PCR检测

利用PCR检测SARS的实验室应具有PCR操作的经验。他们应采用质控程序并在其国内或WHO指定的多中心合作网络实验室中拥有一个合作实验室以交叉验证其阳性结果。

进行SARS特异性PCR检测的实验室应当采取严格的阳性结果确证标准,尤其在那些低流行地区,这些地方的阳性预测值会偏低。

用于SARSPCR试剂盒已经商业化,包括内对照。PCR引物及程序已经公布。阳性对照RNA可由德国汉堡市的Bernhard-Nocht Institute提供。

检测SARSPCR敏感性取决于标本及病程中的采样时间。这可能导致真正SARS病例PCR检测阴性(假阴性)。如果使用多样本或多部位采样可提高敏感性。

如果操作程序中严格遵守质控指南,PCR特异性的特异性相当好。假阳性的结果可能由技术问题引起,因此每一PCR阳性结果必须严格确证。

抗体检测

ELISAIFA检测方法正在各研究实验室建立之中。

因为SARS是人类的一个新疾病,未被SARS冠状病毒感染的人群中未发现此病毒的抗体。

血清抗体由急性期至恢复期的升高具有高特异性

原文参考
 翟理杰编译 洪晓武 丁福校对
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