Plasmidfast1000
大量质粒DNA快速抽提试剂盒
保存条件：RNase A液4℃（或-20℃）保存，试剂盒其它部分室温保存，保质期1年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 处理菌量 | 50ml-150ml / 次 |
| 柱容量 | 200μg |
| 洗脱体积 | 300-500μl |
| 产量 | 50-200μg/管(可同时做4-8管，得到1mg以上质粒DNA) |
| 纯度 | OD260/280: 1.7-1.9 |
| LPS污染 | 极微量 |
| 特色 | 1. 使用改进的新配方，较之传统的通用配方，减少了产物中SDS的残留，使酶切、测序、转化的成功率得到保证 2. 新配方大大减少了环状卷曲型DNA的产生 3. 使用特色的膜处理技术，有效增加了得率 |
| 用途 | 适用于大多数分子生物学实验 |
试剂盒组成 ： (Catalog no. 220060 10 次)
| RNaseA | 1200μl (用前将储存管瞬时离心) |
| P1液 | 60ml |
| P2液 | 60ml |
| P3液 | 90ml |
| 洗液 | 60ml（已加有15ml）×2瓶 |
| 洗脱液 | 10ml |
| 内套柱，外套柱 | 10套 |
| 说明书 | 1份 |
操作流程：
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1． 取培养好的菌液50ml-150ml，用离心管收集菌体，12,000g，4℃离心2min。
2． 倒干全部液体，加入6ml P1液及120μl RNase A，充分振荡散开沉淀，室温静置5min。
3． 加入6ml P2液，立即温和颠倒混匀5次。静置3-5min，成均一透明液体。
4． 加入9ml P3液，立即温和颠倒混匀10次，出现白色悬浊液。
5． 12,000g，离心10min。上清倒入内套管，12,000g，离心1min 。
6． 弃去外套管中液体，内套管中加入5ml洗液，离心1min。再重复此过程洗一次。
7． 取出内套管，弃去外套管中液体，仍然套回内套管，不加洗液，离心1min。
8． 将内套管放入新的外套管中，在膜中央加入洗脱液300-500μl，室温放置2min。
9． 12,000g，离心1min，即获得质粒DNA。
注意事项：
1. 试剂盒室温保存，保质期1年。
2. 首次使用时可以将RNase A全部加入P1液中摇匀，用后将P1液瓶置4℃保存。
3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇，用后拧紧瓶盖。
4. P2液在低温下会析出白色沉淀，37℃加热溶解混匀后使用，对提取没有影响。
5. 按1:500～1:1000比例接菌种体于250ml选择性LB培养基中，37℃培养12~16小时。若想达到最大质粒拷贝效果，应注意：a.培养容器为培养基体积2~4倍；b.细菌密度最终能达到1×109cells/ml（OD600≤4.0）；c.起始菌体量与菌体浓度有关：菌体浓度高，起始量低一点; 菌体浓度低，起始量高一点。每一次的菌体范围在50-250ml內；d.细菌培养不要超过16小时，否则细菌会崩溃，引起细菌大量死亡，导致质粒丢失；e.抗生素浓度要正确，确保大肠杆菌含有目的质粒。
6. 个别大肠杆菌RNA含量丰富，最后质粒会含有小量RNA，应当将步骤2、3适当延长静置时间。
7. 加入P2液后温和地翻转颠倒混匀5次，用力振荡会导致基因组DNA片段断裂释出。混匀后放在室温中静置3-5min，以保证样本充分裂解为均匀透明的液体，时间太短将不能保证细菌被充分裂解，时间太长会会导致基因组DNA片段断裂。
8. 加入P3液后要立即温和地翻转颠倒10次，即可保证充分混匀，用力振荡会导致基因组DNA断裂。
9. 步骤5中建议将离心后的上清直接倒入内套管，用移液器吸入上清容易带入少量沉淀物。
10. 裂解上清液加入内套管中离心1min结束后，如管中仍有液体，表明样本超量或裂解不完全导致吸附膜阻塞。处理方案是：a.减少样本量；b.加入P1液后保证裂解充分。
11. 尽量保证在膜中央加入洗脱液300μl-500μl，低于300μl将不能保证吸附膜被充分浸润；室温放置2min可以洗脱绝大部分DNA，如果要增加洗脱率或为大质粒，可置55℃-60℃ 水浴5min，或加入55℃-60℃预热的洗脱液。洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的洗脱效率，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6（10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA）。
12. 测序用质粒抽提洗脱时，加入pH>7.0的水300μl，55℃-60℃水浴5min后离心。
13. 提取的DNA可以放在4℃或-20℃保存，长期应在-80℃分装保存，避免反复冻融。