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常用贮存液的配制1
2003/10/25 23:55:45  飞捷生物
 

 

溶液

 

配制方法

 

说明

30%丙烯酰胺

29g丙烯酰胺和1g N,N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中,加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌 ,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。

小心:丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。

在贮存期间,丙烯酰胺和双酚烯胺会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸。

 

 

 

见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。

40%丙烯酰胺

380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L

放线菌素D

20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中,110稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D(分子量为1255D)纯品在水溶液中的摩尔消光系数为21900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。

小心:放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制溶液时必须戴手套并在化学通风橱内操作,而不能在开放的实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等的添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。

0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP

0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOHPH值至7.0,用蒸馏水定容至1ml,分装成小份保存于-70℃。

 

10mol乙酸铵

770g乙酸铵溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。

 

10%过硫酸铵

1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。

 

BCIP

0.5g5--4--3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

 

2×BES缓冲盐溶液

用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]1.6g NaCI0.027g Na2PHO4,室温下用HCI调节该溶液的pH值至6.96,然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。

 

1mol/L CaCI2

200ml纯水中(Milli-Q水或相当级别的水)溶解54g CaCI2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

 

2.5mol/L CaCI2

20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCI2.6H2O,0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用纯水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。

1mol/L二硫苏糖醇(DTT

20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

DTT或含有DTT和溶液不能进行高压处理。

0.5mol/LEDTA(PH8.0)

800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na·2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0(约需20g NaOH颗粒),然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。

EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0时,才能完全溶解。

溴化乙锭(10mg/ml

100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。

小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。这些溶液使用后应进行净化处理。

2×HEPES缓冲盐溶液

用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCI0.074g KCI0.027g Na2HPO4·2H2O0.2g葡聚糖和1g HEPES,用0.5mol/L NaOH调节pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。

 

IPTG

IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3D),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

 

1mol/L乙酸镁

800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L,过滤除菌。

 

1mol/L MgCI2

800ml水中溶解203.3g MgCI2·6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。

MgCI2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。

β-巯基乙醇(BME

一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4

BME或含有BME的溶液不能高压处理。

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