起始材料是RNA，须先通过逆转录得到cDNA后才能进行正常PCR扩增。
RT反应：
Mg+ 4μl (2.5mm 终浓度)
dNTP 2μl (50μm mix)
10xR buf 2μl
oligo-dT 1μl
Rev-酶 0.2μl
RNAsin 0.5μl
DEPC-H2O 适量
RNA 10μg
使总体积为20μl，在PCR仪或42℃水浴45-60分钟。
PCR是体外扩增DNA的反应，标准PCR的反应体积是25μl、50μl或100μl，在0.5ml或0.2ml离心管中进行。
1．设备、材料
PCR扩增仪、微量高速离心机（0~12,000r/min）、微量可调加器（0~20μl、0~100μl、0~200μl）、微量加样器吸头、微量离心管（0.5ml、1.5ml）、微型离心管架。
2．试剂
PCR扩增试剂盒，其中含有10×Buffer、Taq酶、2mmol/L dNTP溶液、上下游引物（各10pmol/μl）、模板DNA、液体石蜡（高压灭菌）、无菌水。
3．加样方法
取0.5ml无菌离心管，依次加入10×Buffer2.5μl、dNTP2.5μl、上游引物1μl、下游引物1μl、模板DNA 5μl，最后用无菌水补足至25μl，混匀，离心数秒，经95℃ 5分钟变性后，加入1.4μl Taq酶及2滴液体石蜡，离心数秒即可上机扩增。
4．反应条件
根据扩增片段长度的不同应使用不同的循环参数。
表2-1 扩增不同长度DNA片段常选用的循环参数
| 扩增产物长度 | 100bp | 500bp | 1000bp | 2000bp |
| 变性（94℃） | 30s | 30s | 60s | 60s |
| 复性（55℃） | 30s | 60s | 60s | 60s |
| 延伸（72℃） | 60s | 60s | 120s | 180s |
常作30~40次循环，循环完毕，最后在72℃总延伸2-10分钟。反应结束后，取出反应管，使之冷却到室温后放4℃保存或直接用于分析。