Cleanfast
PCR产物及DNA片段回收、浓缩试剂盒
保存条件:室温,保质期2年。
技术支持:使用中遇到任何问题或建议,请通过E-mail(question@fastagen.com)与我们的技术支持部门联系,部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍:
回收率 | 80-90% |
耗时 | 8-10min |
原理 | 应用硅膜捕获核酸 |
处理量 | 100μl 样本体积/次提取 ,6μg DNA捕获能力 |
适用 | 目的DNA:80bp-100kb |
洗脱体积 | 20-50μl |
特点 | 1. 采用独特的C1提取液,较目前国内外广泛采用的6M NaI提取液的结合能力更强 2. 使用特色的膜处理技术,使膜的吸附力增强,回收率更高 |
用途 | 从PCR、酶切等产物中回收、浓缩DNA,去除引物、引物二聚体、酶蛋白、单核苷酸、放射性同位素标记的单核苷酸、荧光染料、无机离子等。 |
试剂盒组成 : (Catalog no. 220080 50 次)
C1液 | 30ml |
洗液 | 60ml(已加有15ml) |
洗脱液 | 10ml |
内套柱,外套柱 | 50套 |
说明书 | 1份 |
操作流程:
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1. 取样本100μl(不足100μl则以去离子水补足至100μl),放入1.5ml eppendorf管中,加入C1液400μl,混匀。
2. 将液体吸入内套管中,离心2min。
3. 弃去外套管中液体,内套管中加入500 μl洗液,离心1min。再重复此过程洗一次。
4. 取出内套管,弃去外套管中液体,仍然套回内套管,不加洗液,离心1min。
5. 将内套管取出,放入新的eppendorf管中,在膜中央加入洗脱液20-50μl。
6. 室温放置2min(要增加洗脱率或为大片段DNA时,55℃-60℃温浴5min)。
7. 离心1min,获得回收的DNA片段。
注意事项:
1. 试剂盒室温保存,保质期2年。
2. 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm。室温离心。以eppendorf 5417离心机为例,12,000rpm=13,362g,其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇,用后拧紧瓶盖。
4. 样本体积100μl回收效率最好,增加和减少样本体积会降低回收率。
5. 每次离心后取出内套管时应小心,避免外套管中液体沾染内套管底部而影响纯化质量。
6. 尽量保证在膜中央加入洗脱液20μl-50μl,低于20μl将不能保证吸附膜被充分浸润;室温放置2min可以洗脱绝大部分DNA。如果要增加洗脱率或为大片段DNA时,可置55℃-60℃ 温浴5min。
7. 洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的洗脱效率,而国内实验室用水大多呈偏酸性,自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6(10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA)。
8. 回收质量可用OD260/280比值来判断,但电泳检测更为可靠。国内外同类产品OD260/280比值一般在1.1~1.4 之间,本试剂盒所得DNA比值约1.4,比值偏低主要是核酸浓度太低及一些无机离子的存在,不影响其他分子生物学操作。
9. 本试剂盒的突出优点是操作方便快捷。但采用glass milk提取方法,回收率超过95%,对珍贵的少量目的片段,建议使用此方法(我们提供的Cleanmilk胶回收试剂盒即采用glass milk方法,回收率高,详细资料请查阅本公司网站www.fastagen.com)。