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Cleanfast ― PCR产物及片段回收、浓缩试剂盒
2006/4/22 2:59:55  飞捷生物
 

Cleanfast

 

 

 

PCR产物及DNA片段回收、浓缩试剂盒

 

Catalog no. 220080    50

 

保存条件室温,保质期2年。

 

技术支持使用中遇到任何问题或建议,请通过E-mailquestion@fastagen.com)与我们的技术支持部门联系,部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。

性能介绍

 

回收率

80-90%

耗时

8-10min

原理

应用硅膜捕获核酸

处理量

100μl 样本体积/次提取 6μg DNA捕获能力

适用

目的DNA80bp-100kb

洗脱体积

20-50μl

特点

1.    采用独特的C1提取液,较目前国内外广泛采用的6M NaI提取液的结合能力更强

2.    使用特色的膜处理技术,使膜的吸附力增强,回收率更高

用途

PCR、酶切等产物中回收、浓缩DNA,去除引物、引物二聚体、酶蛋白、单核苷酸、放射性同位素标记的单核苷酸、荧光染料、无机离子等。

 

试剂盒组成 (Catalog no. 220080   50 )

 

C1液

30ml

洗液

60ml(已加有15ml

洗脱液

10ml

内套柱,外套柱

50

说明书

1

 

操作流程:

实验操作前请先认真阅读“注意事项”

 

1. 取样本100μl(不足100μl则以去离子水补足至100μl),放入1.5ml eppendorf管中,加入C1400μl,混匀。

2. 将液体吸入内套管中,离心2min

3. 弃去外套管中液体,内套管中加入500 μl洗液,离心1min。再重复此过程洗一次。

4. 取出内套管,弃去外套管中液体,仍然套回内套管,不加洗液,离心1min

5. 将内套管取出,放入新的eppendorf管中,在膜中央加入洗脱液20-50μl

6. 室温放置2min(要增加洗脱率或为大片段DNA时,55-60℃温浴5min)。

7. 离心1min,获得回收的DNA片段。

 

注意事项:

 

1. 试剂盒室温保存,保质期2年。

2. 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm。室温离心。以eppendorf 5417离心机为例,12,000rpm13,362g,其它类型离心机转速应达到相近的g数。

3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇,用后拧紧瓶盖。

4. 样本体积100μl回收效率最好,增加和减少样本体积会降低回收率。

5. 每次离心后取出内套管时应小心,避免外套管中液体沾染内套管底部而影响纯化质量。

6. 尽量保证在膜中央加入洗脱液20μl-50μl,低于20μl将不能保证吸附膜被充分浸润;室温放置2min可以洗脱绝大部分DNA。如果要增加洗脱率或为大片段DNA时,可置55-60 温浴5min

7. 洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的洗脱效率,而国内实验室用水大多呈偏酸性,自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.610mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA)。

8. 回收质量可用OD260/280比值来判断,但电泳检测更为可靠。国内外同类产品OD260/280比值一般在1.11.4 之间,本试剂盒所得DNA比值约1.4,比值偏低主要是核酸浓度太低及一些无机离子的存在,不影响其他分子生物学操作。

9. 本试剂盒的突出优点是操作方便快捷。但采用glass milk提取方法,回收率超过95%,对珍贵的少量目的片段,建议使用此方法(我们提供的Cleanmilk胶回收试剂盒即采用glass milk方法,回收率高,详细资料请查阅本公司网站www.fastagen.com)。

 

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