DNAfast2000
大量高质量基因组DNA快速抽提试剂盒
适用范围：全血、组织、细胞、骨髓、体液
保存条件：DC3液4℃保存，试剂盒其它部分室温保存，保质期1年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 处理样本量 | 全血<2ml，细胞<2×107，组织<100mg |
| 耗时 | 30min |
| 步骤 | 裂解，分相，析出，清洗，干燥 |
| 产量 | 30-60μg/ml全血，40-60μg/1×107细胞，50-100μg/100mg组织 |
| 最终溶解体积 | 10-200μl |
| 纯度 | OD260/OD280: 1.7-1.9 |
| 片段长度 | 98%以上>48.5kb，大部分为100-200 Kb 高分子量基因组DNA |
| 特点 | 1. 提取的DNA大部分为100-200 Kb 高分子量基因组DNA，纯度高，可以满足几乎所有的下游实验的苛刻要求。 2. 可以处理从微量到大量的不同类型样本，单次提取可以获得多至200μg DNA。 3. 全血处理简便快捷，无需用Ficoll离心，单次处理多至2ml全血。 4. 方法稳定，每次提取都可以成功获得高质量DNA。 5. 全程常温操作，不需Proteinase K消化，步骤少，在手操作时间小于10min。 6. 组织处理采用独创的网筛方法，快速方便，不需要另外准备匀浆器，或进行液氮处理，可以单次处理较大量的组织样本。 7. 可以完全提取细胞凋亡的DNA ladder，尤其是少量凋亡的小片断。 8. 提取的DNA稳定性高，可4℃保存6个月，-80℃长期保存。 |
| 用途 | 包括PCR, Southern Blot, RFLP, RAPD, Microsatelite analysis, HLA typing 等几乎所有下游实验。 |
试剂盒组成 ： ( Catalog no. 220040 100 次)
| DC1 | 30ml（特殊需要的客户提供60ml） |
| DC2 | 50ml |
| DC3 | 60ml |
| 洗液 | 100ml（已加有25ml）×2 |
| 洗脱液 | 10ml |
| 无水乙醇 | 100ml（提供专用空瓶，待加入） |
| 钢网，平皿，研磨棒 | 需要时另配（提取组织DNA时用） |
| 说明书 | 1份 |
操作流程：
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1． 样本预处理
a． 抗凝全血及骨髓穿刺液：取10μl -2,000μl（样本中如有血凝块，应予去除），加入1/5体积的DC1液，立即颠倒混匀1min，离心12,000g，1min。吸弃全部上清（最好用负压吸引器吸除，尽量吸尽管盖和管壁上残留的液体），留下管底的沉淀。加入DC1液100μl，以手腕充分用力振荡10次，确保形成均一的细胞悬液；
b． 培养细胞：悬浮细胞低速离心收集后，吸弃全部上清，加入DC1液100μl，以手腕充分用力振荡10次，确保形成均一的细胞悬液；贴壁细胞留下约1ml培养基，加入200μl的DC1液，轻轻晃动2min后，收集全部液体放入eppendorf管中，离心12,000g，1min，留下细胞团块，加入DC1液100μl，以手腕充分用力振荡10次，确保形成均一的细胞悬液；
c． 组织块：先在平皿中加生理盐水（1ml/100mg组织），研磨组织通过钢网，收集过网悬液放入eppendorf管中，低速离心收集后吸弃全部上清，加入DC1液100μl，以手腕充分用力振荡10次，确保形成均一的细胞悬液；
d． 体液及其它液体性样本：尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取1-10ml，离心12,000g，1min，吸弃上清，加入DC1液100μl，充分震荡形成均匀悬液；
2． 加入DC2液500μl，以手腕充分用力振荡混匀10-20次，成为均一的裂解液，静置10min。
3． 加入DC3液600μl， 温和地翻转颠倒混匀10-20次，呈均质乳糜状液体后，离心2min。
4． 小心吸取上层液体400-500μl（注意不要搅动界面层）至新的eppendorf管中，再加入2倍体积无水乙醇，立即颠倒混匀1min，使絮状DNA全部析出。离心1min。
5． 倒去上清，加洗液1ml，震荡悬浮沉淀后，离心1min。再重复一次。
6． 倒去液体后，倒置在吸水纸上5min，然后真空冻干，或平放室温晾干15min左右。
7． 加入洗脱液10-200μl（或加入pH>7.0的水），轻轻吹打数次，溶解获得基因组DNA。
注意事项：
1. 除DC3液4℃保存外，试剂盒其它部分室温保存。保质期1年。
2. 离心速度均为12,000g，室温离心（注意：不要低温离心）。离心速度以eppendorf 5810离心机为例：12,000g=10,629rpm，其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. DC3液具有强烈腐蚀性，操作时要戴手套和防护眼镜，在通风柜中进行，若不慎沾染，立即用大量清水冲洗，必要时到门诊处理。用后拧紧瓶盖，置4℃保存。
4. 首次使用时在洗液瓶中加入75ml分析纯无水乙醇。另外提供一个空瓶，首次使用时倒满分析纯无水乙醇，在步骤4 使用。
5. 对于1.5ml以下全血，可以用1.5ml及2ml离心管在台式离心机上操作；对于2-10ml全血，建议使用DNAfast5000（具体方法可以查阅本公司网站www. fastagen.com）。
6. 抗凝全血、骨髓采集后尽快提取，置4℃冰箱可以保存3-5天，超过7天则出现大量凋亡片断。也可以采集后置-20℃冻存，数月内提取对DNA质量影响不大。未抗凝的样本不能用于提取。
7. 如果样本量较小，可以相应减少DC2用量至200μl、DC3的用量至300μl。
8. 加入DC2液后要用手腕充分用力振荡10-20次（不会引起DNA断裂），以确保样本完全溶解（样本未被充分裂解时可以见到有半透明的絮状物，粘滞度较高；充分裂解后为均匀透明的液体，粘滞度降低）。振荡不充分会导致DNA得率降低。
9. 加入DC3液后要温和地翻转颠倒混匀，用力振荡会导致DNA片段断裂。要求提取DNA的分子量越高，混匀时就越要轻柔缓慢，直至呈均质的乳糜状均一液体。
10. 有时离心后出现界面上层液体混浊或呈白色固体状，原因大多是样本预处理时残留红细胞及蛋白太多，应当在加入DC1离心后尽量吸净上清，也可以再加一个步骤：吸净上清后，缓缓加入1ml生理盐水，关盖后轻缓颠倒离心管数次，涮去管壁及顶盖的血液（注意不要使底部的沉淀脱落），缓缓倒去或吸去液体后，再加入DC1液100μl振荡。
11. 吸取上层液体时用粗口吸管（普通1ml 加样枪头口太小，会切割DNA，剪去约5mm尖后即可），注意不要搅动界面层，如果吸入了界面沉淀物，应当舍弃。
12. 絮状DNA全部析出后也可以用加样枪头挑出放入另一1.5ml的eppendorf管中再清洗。离心清洗后DNA贴壁不是很牢固，要小心吸弃上清，不要把DNA沉淀吸掉。
13. 采用倒置室温干燥或真空冻干去除DNA中残留的乙醇的方法，避免使用加热的方法。
14. 加入洗脱液10-200μl后获得基因组DNA会即刻溶解，可以轻轻吹打数次。如果产物难以溶解，表明样本预处理时残留红细胞及蛋白过多。
15. 洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的溶解能力，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6（10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA）。
16. 对石蜡切片组织、甲醛固定组织，直接用本试剂盒不能很好裂解样本，应当先以Proteinase K、SDS处理（具体方法可以查阅本公司网站www. fastagen.com），其后按DNAfast2000操作流程提取DNA。
17. 提取的DNA可以放在4℃或-20℃保存，长期应在-80℃分装保存，避免多次反复冻融。