DNAfast500
小量基因组DNA极速抽提试剂盒
保存条件：室温，保质期2年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 样本量 | 抗凝全血或骨髓1-500μl，培养细胞<2×106 ，组织 <10mg |
| 耗时 | 15-20min |
| 柱容量 | 15μg |
| 洗脱体积 | 50-100μl |
| 产量 | 8-13μg/500μl全血，6-10μg/2×106细胞，4-12μg/10mg组织 |
| 纯度 | OD260/280 : 1.7-1.9 |
| 片段长度 | 90%以上>48.5kb，大部分为50-100 Kb 高分子量基因组DNA |
| 特点 | 1. 操作简单，步骤少，耗时短，尤其适于500μl以下全血DNA的抽提 2. 不需Proteinase K消化，无酚等有毒试剂，全程常温操作 3. 确保生物安全性，临床样本加入DE2液后可以快速灭活所有病源微生物 4. 方法稳定，每次提取都可以成功获得DNA 5. 纯度高，片段长，易于酶切，不易降解，可以满足大部分后继实验要求 |
| 用途 | PCR, PCR-SSP, Southern Blot, Microsatelite analysis, HLA typing 等 |
试剂盒组成: ( Catalog no. 220022 50 次)
| DE1液 | 60ml |
| DE2液 | 30ml |
| 洗液 | 60ml（已加有15ml） |
| 洗脱液 | 10ml |
| 内套柱，外套柱 | 50套 |
| 钢网，平皿，研磨棒 | 需要时另配（提取组织DNA时用） |
| 说明书 | 1份 |
操作流程:
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1． 取1-500μl抗凝全血或骨髓放入1.5ml eppendorf管中，加入DE1液 1ml，颠倒混匀3-5次，离心1min，充分吸弃上清，留下底部细胞团块。
2． 加入DE1液100μl，以手腕充分用力振荡10次，确保形成均一的细胞悬液。
3． 加入DE2液 600μl，以手腕充分用力振荡20次，室温静置8-10min，中间振荡1次。
4． 将样本裂解物吸入或直接倒入内套管，离心2min。
5． 弃去外套管中液体，内套管中加入500 μl洗液，离心1min。再重复此过程洗一次。
6． 取出内套管，弃去外套管中液体，仍然套回内套管，不加洗液，离心1min。
7． 将内套管取出，放入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液50μl-100μl。
8． 室温放置2min后，离心1min，获得基因组DNA。
注意事项:
1. 试剂盒室温保存，保质期2年。
2. 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm，室温离心（有条件可4℃离心）。以eppendorf 5417离心机为例，12,000rpm=13,362g，其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇，用后拧紧瓶盖。
4. 加DE1液100μl后，要用手腕充分用力振荡10次（用震荡器效果不好），确保形成均一的细胞悬液，此步骤非常重要，否则此后DNA易聚集，难以被充分裂解，降低得率。
5. 加DE2液后，要用手腕充分用力振荡20次（不会引起DNA断裂），以确保样本完全溶解（样本未被充分裂解时可以见到有半透明的絮状物，粘滞度较高；充分裂解后为均匀透明的液体，粘滞度降低）。振荡不充分会导致DNA得率降低。
6. 1-50μl微量全血提取时也可以直接从步骤3开始，加DE2裂解液提取（直接裂解法），产物可用于PCR扩增等实验，但每次全血体积取50μl以下。
7. 培养细胞的提取：悬浮细胞（2×106）离心后吸去上清，留下细胞团块，从步骤2开始提取；贴壁细胞倒去培养上清后，加DE1液（100μl/2×106细胞），静置2min，轻轻晃动形成细胞裂解液，取100μl放入eppendorf管中，从步骤3开始提取。
8. 组织的提取：先在平皿中加DE1液（100μl/10mg组织），研磨组织通过钢网，收集过网悬液100μl放入eppendorf管中，从步骤3开始提取。
9. 样本单次提取的限量是：全血<500μl，培养细胞<2×106，组织 <10mg。步骤4离心结束后，如内套管中仍有液体，表明样本裂解不完全。处理方案是：a. 减少样本量；b. 加入DE1、DE2液后充分震荡；c. 如已发生阻塞又不想放弃此标本，可用加样枪头划破内套管膜的表层，再离心1min。
10. 本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6（10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA）。尽量保证在膜中央加入洗脱液50-100μl，低于50μl将不能保证吸附膜被充分浸润；室温放置2min后可以洗脱绝大部分DNA，如果是要求全部回收（如微量DNA提取），则放入55℃-60℃水浴5min。提取的DNA可以放在4℃或-20℃保存数周，长期应在-80℃分装保存。