RNAfast2000
大量全血总RNA 快速抽提试剂盒
适用范围：全血、骨髓
保存条件：室温，保质期2年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 样本量 | 抗凝全血、骨髓2-10ml |
| 耗时 | 30 min |
| 洗脱体积 | 25-50μl |
| 产量 | 2-8μg/ml全血 |
| 纯度 | OD260/OD280: 1.9－2.1 |
| 特点 | 1. 特别设计针对2-10ml全血的提取，无需淋巴细胞分离液离心，可以获得全部白细胞，不丢失粒细胞，因此获得的RNA产量增加一倍 2. 全血无需立即提取RNA，预处理后可以长期保存于RNAwait后再提取。 3. 获得的RNA无酚残留，DNA污染少， RNase污染少 4. 操作中RNA不易丢失，每次提取得率较高，不同提取批次间变异小 5. 提取速度快，操作简单，半小时即可以完成10ml全血RNA的提取 |
| 用途 | RT-PCR，表达芯片分析，构建cDNA文库，RPA，Northern Blot等 |
试剂盒组成 ( Catalog no. 220150 50 次)
| RC1 | 500ml×2瓶 |
| RC2 | 10ml |
| RC3 | 30ml |
| 洗液 | 60ml（已加有15ml） |
| 洗脱液 | 10ml |
| 内套柱，外套柱 | 50套 |
| 说明书 | 1份 |
操作流程
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1． 取抗凝全血、骨髓2-10ml（样本中如有血凝块，应予去除），混匀后放入尖底离心管（7ml 以下用15ml管，7ml 以上用50ml管），加入等体积RC1液，拧紧管盖后颠倒混匀数次，室温放置5min。
2． 300g离心3min，小心倒去上清，留下底部沉淀（带有红细胞，约500μl-1ml），加入RC1液10ml，拧紧管盖后颠倒混匀数次，使底部沉淀全部散开。
3． 300g离心3min，倒去上清后，再用移液枪或负压吸引器充分吸干残留的上清。
4． 加入RC2液100μl，立即用枪尖吹打数次后，立即全部吸入RNase-free 的1.5ml eppendorf里，12,000g（下同）离心30s。立即吸取所有上清放入新的RNase-free 的1.5ml eppendorf里。
5． 立即加入RC3液500μl（预先在eppendorf里加入RC3液更好），充分颠倒混匀1min。
6． 将混匀后的液体吸入或直接倒入内套管，离心1min。
7． 弃去外套管中液体，内套管中加入500 μl洗液，离心1min。再重复此过程洗一次。
8． 取出内套管，弃去外套管中液体，仍然套回内套管，不加洗液，离心1min。
9． 将内套管移入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液（或pH>7.0的DEPC处理水）25-50μl，室温静置1min，离心1min，获得总RNA。
注意事项
1. 试剂盒室温保存，保质期2年。
2. 室温离心（有条件可4℃离心），离心时不要使用急速刹停。离心速度以eppendorf 5810离心机为例：300g =1,221rpm， 12,000g=10,629rpm。
3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇，用后拧紧瓶盖。
4. 避免环境中RNA酶污染，操作要戴手套，所有枪头、离心管和eppendorf管以DEPC水处理。移液枪保证洁净无RNA酶污染。如果把试剂放在超净台（普通超净台或专用的桌面PCR超净台）中操作，可以有效减少RNA酶污染。
5. 全血、骨髓直接冻存后RNA大部分丢失，不能用于提取。血液、骨髓抽取后应在4小时内提取RNA。也可以在步骤3的预处理结束后，将分离获得的细胞长期保存于RNAwait后再提取（详细资料请查阅本公司网站www.fastagen.com）。
6. 步骤2在底部沉淀全部散开后如留有血块，应先去处血块后进入下一步操作。
7. 步骤4应在1-2min内快速完成，否则RNA容易降解，降低产量。
8. 尽量保证在膜中央加入洗脱液25μl-50μl，低于25μl将不能保证充分浸润吸附膜。
9. 洗脱液pH<7.0时会明显降低RNA的洗脱效率，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6。