RNAfast1000
总RNA 快速抽提试剂盒
适用范围：全血、骨髓、组织、细胞、体液
保存条件：室温，保质期2年。RB1液置4℃避光保存保质期更长。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 样本量 | 全血、骨髓1-2ml，培养细胞<1×107，组织<30mg，体液根据细胞量 |
| 耗时 | 培养细胞: 22 min ；全血: 25 min |
| 洗脱体积 | 25-50μl |
| 产量 | 3-10μg/ml全血，100-300μg/1×107细胞，1-6μg/ mg组织 |
| 纯度 | OD260/OD280: 1.9－2.1 |
| 特点 | 1. 特别设计针对1-2ml全血的提取，无需淋巴细胞分离液离心，不丢失粒细胞，因此获得的RNA产量增加一倍 2. 是替代Trizol的升级产品，获得的RNA产量与Trizol提取相同，但酚和乙醇残留少，提取过程中被RNase污染机会少，提取速度快 3. 使用Trizol提取少量RNA时，反复离心沉淀往往造成RNA丢失，每次提取的得率不一。本试剂盒可以捕获少量RNA，不同提取批次间变异小 |
| 用途 | RT-PCR，表达芯片分析，构建cDNA文库，RPA，Northern Blot等 |
试剂盒组成 ( Catalog no. 220140 50 次)
| RB1 | 50ml |
| RB2 | 20ml |
| 洗液 | 60ml（已加有15ml） |
| 洗脱液 | 10ml |
| 内套柱，外套柱 | 50套 |
| 钢网，平皿，研磨棒 | 需要时另配（提取组织RNA时用） |
| 说明书 | 1份 |
操作流程
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1． 样本预处理
a． 抗凝全血、骨髓：取1-2ml放入离心管中，12,000rpm离心2min，吸取中间白膜层细胞100μl至1.5ml eppendorf管中（吸取时用普通加样枪头口太小，剪去约5mm尖即可。吸取的白膜层细胞中混有大量红细胞，不影响后继提取）；
b． 组织块：剪切成小块后放入平皿（置冰袋上预冷）中的钢网上，加入PBS或生理盐水（约1ml/30mg组织），用研磨棒将组织研磨挤压过钢网，收集过网悬液，取100μl放入eppendorf管中；
c． 培养细胞：悬浮细胞离心后留下细胞团块和适量上清（>100μl/1×107细胞），充分吹打直至没有细胞团块，取100μl放入eppendorf管中；贴壁细胞消化后处理同上。
d． 体液及其它液体性样本：尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取1-10ml，3,000rpm离心2min，留下沉淀及约100μl上清，充分震荡悬浮沉淀，取100μl放入eppendorf管中；
2． 处理好的样本中，加入RB1液1ml，充分颠倒混匀直至完全溶解，室温放置5min。
3． 加入氯仿200μl，充分颠倒混匀1min，成均一的乳糜状，离心5min。
4． 将上清液小心转移到RNase-free 的1.5ml eppendorf里(离心分层后，可以吸取上层无色液体约为350µl，注意不要吸取任何中间层物质)。
5． 加入RB2液350μl，充分颠倒混匀1min。
6． 将混匀后的液体吸入或直接倒入内套管，离心1min。
7． 弃去外套管中液体，内套管中加入500 μl洗液，离心1min。再重复此过程洗一次。
8． 取出内套管，弃去外套管中液体，仍然套回内套管，不加洗液，离心1min。
9． 将内套管移入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液（或pH>7.0的DEPC处理水）25-50μl，室温静置1min，离心1min，获得总RNA。
注意事项
1. 重要提示：RB1具有强烈腐蚀性，操作时要戴手套和防护眼镜，最好在通风柜中进行，若不慎沾染，立即用大量清水冲洗，必要时到门诊处理。
2. 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm，室温离心（有条件可4℃离心）。以eppendorf 5417离心机为例，12,000rpm＝13,362g，其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇，用后拧紧瓶盖。氯仿自备。
4. 避免环境中RNA酶污染，操作要戴手套，所有枪头和eppendorf管以DEPC水处理。
5. 血液抽取后应在4小时内提取RNA。冻存的血液RNA大部分丢失，不能用于提取。
6. 尽量保证在膜中央加入洗脱液25μl-50μl，低于25μl将不能保证充分浸润吸附膜。
7. 洗脱液pH<7.0时会明显降低RNA的洗脱效率，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6。