Fastazol
动物组织、细胞RNA高效提取液
| Catalog no. 220120 50 ml Catalog no. 220121 100 ml |
保存条件：15–25°C，保质期6个月，2-8℃，保质期1年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：Fastazol(Trizo1000)是在原有Trizol基础上改进型的总RNA抽提试剂，由异硫氰酸胍等配制而成，能迅速破碎细胞，释放出总RNA，同时有效抑制细胞内的RNase。具有以下特点：
l 抗污染强：新配方在离心分层后，中间层很致密，吸取上层液体时中间层（含DNA等杂质）不易被搅动，因而不易造成DNA及蛋白质污染，提取RNA的质量也更加纯净。
l 裂解力强：较同类产品裂解组织量更大、裂解速度更快。可以直接裂解100µl 全血或100µl 血液白膜层细胞，因而提取全血RNA更简单稳定。
l 操作简便：Fastagen以独创的组织研磨器技术预处理组织，省去液氮冷冻或冰浴匀浆预处理组织的烦琐，更方便、快速、安全、RNA降解少。
l 稳定性强：新配方增加了试剂的稳定性，使其室温放置有效期增加到6个月，2-8℃放置有效期增加到1-2年。
注意事项：
1. 重要提示：Fastazol具有强烈腐蚀性，操作时要戴手套和防护眼镜，最好在通风柜中进行，若不慎沾染，立即用大量清水冲洗，必要时到门诊处理。
2. 试剂室温保存有效期6个月，2-8℃保存有效期1年。
3. 需要自备的试剂：氯仿，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，DEPC，DEPC-H2O。
4. 离心速度均为12,000g-14,000g，4℃或室温离心。目前大多数实验室证实室温离心基本不影响RNA提取质量。
5. 避免环境中RNA酶污染，操作要戴手套，所有枪头和eppendorf管以DEPC水处理，移液枪保证洁净无RNA酶污染。如果把试剂放在超净台（普通超净台或专用的桌面PCR超净台）中操作，可以有效减少RNA酶污染。
6. 提取的总RNA置于4℃或冰浴中，立即用于下游实验（如RT-PCR）；或立即置于-80℃冰箱保存，数天内尽快使用。无论采用何种方法提取和保存的RNA，都往往会被很快降解，因而建议避免提取RNA后保存。建议先将标本（细胞、组织）保存在RNA保存液（RNAwait、RNAlater）中，使细胞内的RNA与RNA酶分离，在室温可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃可以长期存档保存标本，RNA质量不受影响，用试剂盒抽提仍可以获得高质量的总RNA（请查阅本公司网站www.fastagen.com）。
操作步骤：
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1. a. 组织：剪切成小块后放入平皿（置冰袋上预冷）中的钢网上（Fastagen可以提供这种组织研磨器），加入PBS或生理盐水（约1ml/30mg组织），用研磨棒将组织研磨挤压过钢网，收集过网悬液，取100μl放入eppendorf管中；也可采用液氮中捣碎或冰浴中匀浆的方法：用液氮将组织冷冻后磨成粉末，趁液氮尚未挥发光时，把粉末转移到eppendorf管中；或者采用匀浆器在冰浴中将组织匀浆。每100mg组织加1.0ml的Fastazol，振荡1min（如果组织的量仅1-10mg，则可以直接加入800µl Fastazol，用枪头反复抽吸混匀）。室温静置5min。
b．贴壁细胞：去除培养基后，按照估计约每1×107细胞直接加入1ml的Fastazol（如6孔板的一孔3T3细胞加入1ml），底部全部浸润后，室温静置5min。
c．悬浮细胞：离心收集细胞后，充分振荡使细胞团散开，再按照每1×107细胞加入1ml的Fastazol，振荡混匀，室温静置5min。
d. 全血：取100µl 抗凝全血或血浆，可以直接加入1ml的Fastazol，充分颠倒混匀直至全部溶解，室温静置5min。更大量的全血抽取后尽快离心（12,000g×2min），吸取100µl白膜层细胞；或用淋巴细胞分离液分离获取淋巴细胞，充分振荡使细胞团散开，再按照每1×107细胞加入1ml的Fastazol，充分颠倒混匀，室温静置5min。
2. 加入200µl氯仿，充分颠倒混匀1min。离心10min。
3. 将上清液小心转移到RNase-free 1.5ml eppendorf里(加入1ml的 Fastazol离心分层后，上层无色液体约为300µl)，加入与上清等体积的异丙醇混匀（不要吸取任何中间层物质，否则会出现基因组DNA污染）。
4. 离心10min。小心移去上清液，防止沉淀丢失。
5. 用1ml 70%乙醇洗涤两次，每次离心5min。
6. 尽可能彻底地吸走上清，但要防止丢失RNA沉淀。
7. 真空离心干燥3-5min，或放在室温下将乙醇空干。
8. 沉淀用30-50µl DEPC-H2O溶解。如发现沉淀很难溶解，60℃水浴5min。
（胰腺等组织中RNase含量有很高，沉淀用100%去离子甲酰胺溶解）。