RNAwait
动物组织、细胞RNA高效保存液
| Catalog no. 220130 100ml Catalog no. 220131 500ml Catalog no. 220132 1.5ml×60 Tubes Catalog no. 220133 5ml ×50 Tubes |
保存条件：15–25°C，保质期2年。低温条件下有结晶析出时加热至37°C溶解后使用。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：生物样本在获取后，由于RNA的特异性和非特异性降解，会引起基因表达谱的变异，从而导致后继检测（如基因芯片、定量PCR、 NASBA、 bDNA 分析等）结果的失真。RNAwait通过使细胞内的RNA与RNA酶分离，可以快速可靠地保存动物组织细胞内的RNA。组织获取后立即浸入RNAwait，在室温可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃标本可以长期存档保存，RNA受到有效保护，用各类方法抽提可以获得高质量的总RNA，由此可以解决RNA样本难于保存的问题，同时确保了基因表达分析的准确性。RNAwait操作简便，仅需将组织或细胞样本直接浸入RNAwait中，并可以在常温下运输，即便温度高达37℃，标本中RNA可以得到24小时的有效保护，省去了用液氮、干冰保存运送的不便和不安全，保存效果也优于二者。大大方便了手术中取材、异地取材后样本的保存和运输，也使异地邮寄生物样本变得简便易行，大大方便了实验室间的科研合作。保存的组织在后继用于提取RNA时，组织匀浆过程不必在低温或液氮中进行，在室温操作即可。更为有意义的是，只要应用-20℃冰箱，就可以长期存档保存、积累临床的RNA标本，建立大型RNA标本库，过去使用液氮罐保存的高消耗、-80℃保存RNA易降解的问题迎刃而解，使得大量病例的分子水平的回顾性研究和分类研究得以实现。并保证了不同时期标本实验研究的同步化和实验流程的一致性，减少了不同批次实验间的误差。
a 操作步骤：
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1. 计算出要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait保存液量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍，2×107细胞的用量是1ml；
2. 选用合适的RNAwait预装管，或将RNAwait按需要量分装入自备保存管；
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状，较小的组织直接取下；
4. 立即完全浸入RNAwait中；
5. 培养细胞离心后倒去上清，在细胞团中直接加入1ml的RNAwait；
6. 存档保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜，然后转移到-20℃冰箱；或者放在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，转移到-80℃冰箱。
注意事项：
1. 组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解或带入其它基因而引起基因表达谱改变。
2. 组织的厚度应<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较大的组织可以切成厚度<0.5 cm的任意片状后保存，较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）则可以直接浸入RNAwait。
3. 冰冻组织不能用RNAwait保存。因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
4. RNAwait的用量应当是组织体积的10倍左右，即100mg组织约用1ml RNAwait，并保证组织全部浸入RNAwait液中及在运输过程中试管口朝上。保存2×107细胞用1ml RNAwait（离心后细胞团不要振荡散开成单细胞）。我们提供的即用型预装RNAwait保存管，预装有1.5ml 及5ml RNAwait两种类型，便于保存、携带各类动物组织和细胞。自备的保存管要求是新的塑料管，并能够承受低温，不必用DEPC去RNase处理。
5. 我们建议在实际操作中不要称量组织，而直接根据目测结果加入RNAwait量，以加快操作和减少污染。例如5mm边长的立方体组织块，体积为125mm3=125µl,故应当加入1.25ml的RNAwait液。小鼠单个脏器的重量约为：肾脏170–240 mg，脾脏100–150 mg，肺脏180–220 mg，心脏100–160 mg，肝脏1.0–1.7 g。加入RNAwait的量宁多勿少。
6. 存档保存时建议将同一组织切成多块，保存于一个试管或多个试管，以利于今后方便地对同一标本进行多次调用。在RNAwait中保存的标本，反复冻融20次也不影响RNA的质量。
7. 存档保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜，然后转移到-20℃冰箱，RNAwait在-20℃时仍为液态，有结晶析出，是正常情况；或者在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，转移到-80℃冰箱，长期存档保存。
8. 样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复温到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍受有效保护。残留少量RNAwait保存液（<50μl）不影响后继提取RNA。
9. 在RNAwait中保存的组织，较新鲜时变硬，而脆度增大，不影响进行匀浆或过钢网处理。
10. 如果用试剂盒（RNAfast200，RNAeasy）提取RNA，则建议保存的组织单块体积不超过5mg，细胞量单管不超过2×106，同时不能采用其中的细胞浆RNA提取方法，可以快速（RNAfast200约10min，RNAeasy约20min）获得高质量的总RNA，单次提取的RNA量可以满足大部分实验的要求。