DNAfast200
微量基因组DNA极速抽提试剂盒
适用范围：全血、细胞、组织、骨髓、体液
保存条件：室温，保质期2年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@fastagen.com）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：
| 样本量 | 抗凝全血1-200μl，培养细胞<2×106，组织 <10mg，体液及其它液体不限量 |
| 耗时 | 15-20min |
| 试剂 | 4种 |
| 步骤 | 4步：裂解，吸附，清洗，洗脱 |
| 柱容量 | 15μg |
| 洗脱体积 | 25-50μl |
| 产量 | 2-5μg/200μl全血，6-10μg/2×106细胞， 4-12μg/10mg组织 |
| 纯度 | OD260/280 : 1.7-1.9 |
| 片段长度 | 90%以上>48.5kb，大部分为50-100 Kb 高分子量基因组DNA |
| RNA污染 | 少量 |
| 特点 | 1. 操作简单，步骤少，耗时短，尤其适于微量DNA的抽提 2. 可以直接处理痰液、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、精液、骨髓等样本 3. 可以提取微量DNA，如单根发根、1μl全血等 4. 可以轻易提取细胞凋亡的DNA ladder 5. 不需Proteinase K消化，无酚等有毒试剂，全程常温操作 6. 确保生物安全性，临床样本加入DA2液后可以快速灭活所有病源微生物 7. 方法稳定，每次提取都可以成功获得DNA 8. 纯度高，片段长，易于酶切，不易降解，可以满足大部分后继实验的要求 |
| 用途 | PCR, PCR-SSP, RFLP, Microsatelite analysis等 |
试剂盒组成: ( Catalog no. 220020 50 次)
| DA1液 | 60ml |
| DA2液 | 30ml |
| 洗液 | 60ml（已加有15ml） |
| 洗脱液 | 10ml |
| 内套柱，外套柱 | 50套 |
| 钢网，平皿，研磨棒 | 需要时另配（提取组织DNA时用） |
| 说明书 | 1份 |
操作流程:
实验操作前请先认真阅读“注意事项”
1． 样本预处理
a． 抗凝全血及骨髓：取1-200μl放入1.5ml eppendorf管中，加入DA1液 1ml，颠倒混匀3-5次，离心1min，充分吸弃上清，留下底部细胞团块，加入DA1液100μl，以手腕充分用力振荡10次，确保形成均一的细胞悬液（间接裂解法）；也可以取1-50μl样本直接放入eppendorf管中（直接裂解法）；
b． 组织块：先在平皿中加DA1液（100μl/10mg组织），研磨组织通过钢网，收集过网悬液100μl放入eppendorf管中（也可采用液氮中捣碎或匀浆的方法）；
c． 培养细胞：悬浮细胞（2×106）离心后吸去上清留下细胞团块，加入DA1液100μl，以手腕用力振荡10-20次，确保形成均一的细胞悬液；贴壁细胞倒去培养上清后，加DA1液（100μl/2×106细胞），静置2min，轻轻晃动形成细胞裂解液，取100μl放入eppendorf管中；
d． 体液及其它液体性样本：尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取1-10ml，离心1min，吸弃上清，加入DA1液100μl，以手腕用力振荡10-20次，确保形成均一的细胞悬液（细胞密度较大的样本参照培养悬浮细胞处理）；痰液用粗头吸管直接吸取约100μl，放入eppendorf管中；
e． 头发：连毛囊拔取后，剪取近发根处约5mm，放入eppendorf管中；
f． 其它：如咽拭子、血迹斑块、沾染布片、烟头、邮票等，直接剪取可能的痕迹沾染部分（直径<1cm），放入eppendorf管中，加DA1液100μl浸泡5min。
2． 加入DA2液 600μl，以手腕充分用力振荡20次，室温静置8-10min，中间再振荡1次（对带有固体物质的样本，最后瞬时离心去除固体不溶物）。
3． 将样本裂解物吸入或直接倒入内套管，离心2min。
4． 弃去外套管中液体，内套管中加入500 μl洗液，离心1min。再重复此过程洗一次。
5． 取出内套管，弃去外套管中液体，仍然套回内套管，不加洗液，离心1min。
6． 将内套管取出，放入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液25μl-50μl。室温放置2min（55℃水浴5min，可以增加DNA洗脱率）。
7． 离心1min，获得基因组DNA。
注意事项:
1. 试剂盒室温保存，保质期2年。
2. 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm，室温离心（有条件可4℃离心）。以eppendorf 5417离心机为例，12,000rpm=13,362g，其它类型离心机转速应达到相近的g数。
3. 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇，用后拧紧瓶盖。
4. 全血可以直接加DA2裂解液后过柱提取（直接裂解法），产物可用于PCR扩增等实验，但每次全血体积不能超过100μl，建议取50μl以下；先用DA1液裂解红细胞的方案（间接裂解法）提取的DNA质量较直接裂解法更好。
5. 加DA1液100μl后，要用手腕充分用力振荡10次（用震荡器效果不好），确保形成均一的细胞悬液，此步骤非常重要，否则此后DNA易聚集成团，难以被充分裂解，降低得率。
6. 加DA2液后，要用手腕充分用力振荡20次（不会引起DNA断裂），以确保样本完全溶解（样本未被充分裂解时可以见到有半透明的絮状物，粘滞度较高；充分裂解后为均匀透明的液体，粘滞度降低）。振荡不充分会导致DNA得率降低。
7. 提取血清、血浆病毒DNA时，加DA2液振荡后静置时间可以缩短至5min；提取微量DNA样本时，可以延长至20min，中间振荡数次；
8. 样本单次提取的限量是：全血<200μl，培养细胞<2×106，组织 <10mg。样本裂解物加入内套管中离心1min结束后，如管中仍有液体，表明样本超量或裂解不完全，导致吸附膜阻塞。处理方案是：a.减少样本量；b.加入DA2液后充分震荡；c.如已发生阻塞又不想放弃此标本，可用加样枪头划破内套管膜的表层，再重新离心1min。
9. 尽量保证在膜中央加入洗脱液25-50μl，低于25μl将不能保证吸附膜被充分浸润；室温放置2min可以洗脱绝大部分DNA，如果是要求全部回收（如微量DNA提取），则放入55℃-60℃水浴5min。
10. 洗脱液pH<7.0时会明显降低DNA的洗脱效率，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6（10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA）。
11. 要处理更大量的样本时，建议采用其它方法（注：我们提供的DNAfast500、DNAfast1000、DNAfast2000、DNAfast5000基因组DNA快速抽提试剂盒，可以满足实验者的不同要求，详细资料请查阅本公司网站www. fastagen.com）。
12. 对石蜡切片组织、甲醛固定组织，直接用本试剂盒不能很好裂解样本，应当先以Proteinase K、SDS处理（具体方法可以查阅本公司网站www. fastagen.com），其后按DNAfast200操作流程提取DNA。
13. 提取的DNA可以放在4℃或-20℃保存数周，长期应在-80℃分装保存，避免反复冻融。